Genetic incorporation of unnatural amino acids and its biochemical applications
- 발행기관 서강대학교 일반대학원
- 지도교수 이현수
- 발행년도 2014
- 학위수여년월 2014. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 도움말 일반대학원 화학과
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/sogang/000000053245
- 본문언어 한국어
- 저작권 서강대학교 논문은 저작권 보호를 받습니다.
초록/요약 도움말
단백질과 DNA 사이의 상호작용을 규명하는 일은 유전자가 어떻게 활성화 혹은 억제되는 지 알아내기 위해 필수적인 일이다. 이러한 연구를 위해 EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay), DNase footprinting법, FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) pair 와 같은 다양한 tool 이 개발되어왔다. photocrosslinking reagent, GFP 융합 단백질, 의 이용 등 다양한 tool이 개발되어왔다. 또한, 단백질을 눈으로 보기 위해서, 일반적으로 GFP (Green Fluorescent Protein) 와 같은 형광 단백질, 혹은 chemical 이나 photocrosslinking reagent 를 이용한 chemical modification 을 이용한다. 그러나 전기영동조건에서는 단백질-DNA 복합체가 해리될 수도 있고, 다른 방법들에서는 단백질 내의 정해진 자리에 probe를 위치하게 하는 것도 어렵다는 단점이 있다. 이러한 한계를 극복하기 위하여 우리는 비자연 아미노산을 유전적으로 도입하는 방법을 이용해 형광아미노산인 L‐(7‐hydroxycoumarin‐4‐yl) ethyl glycine 1 을 Catabolite Activator Protein (CAP)의 Lys26자리에 도입하였다. 그리고 형광물질이 표지 된 DNA와 CAP에 도입된 1 사이에 FRET 현상이 일어나는 것을 관찰하여 단백질-DNA 복합체의 형성을 detection했다. 이를 통해 단백질-DNA 간의 상호작용을 규명하는 새로운 방법을 고안했다. 또한 단백질-DNA 간의 상호작용을 현미경을 통해 직접 관찰하기 위해서 비자연 아미노산인 p-Azido-phenylalanine을 유전적으로 CAP 단백질의 Val43 자리에 도입한 뒤, p-Azido-phenylalanine과 Cy5.5-ADIBO dye를 copper-free click reaction을 통해 연결하여, CAP 단백질을 형광dye로 표지했다.
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