고성능 정상 액체 크로마토그래피 : 극초 분해능 질량 분석법을 이용한 지질의 분석 연구
- 발행기관 서강대학교 일반대학원
- 지도교수 오한빈
- 발행년도 2009
- 학위수여년월 2009. 2
- 학위명 석사
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/sogang/000000044960
- 본문언어 한국어
초록/요약
The most popular mass spectrometry approach in the lipid analysis is an LC-MS/MS method in which a mixture of lipids was separated using a reversed-phase liquid chromatography and followed by tandem mass spectrometry. Identification of lipid molecules is generally made by the analysis of its constituent fragments. This approach is, however, very time-consuming though it has been proved to be very useful in practice. To overcome this issue, we have sought an approach of online normal-phase (NP) separation followed by lipid identification by accurate mass measurements using Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometry (FTICR-MS). High mass accuracy of FTICR-MS allowed unambiguous identifications of lipid species under study without MS/MS tandem mass spectrometry, which was done by comparison of measured mass values of lipid species with those of lipid database (lipidsearch, http://lipidsearch.jp). Normal-Phase Liquid Chromatography separated mixtures of lipid molecules according to its class, for example, Triacylglycerides (TG, positive), phosphatidylinositols (PI, negative), Phosphatidylethanolamines and Phosphatidylcholines (PE and PC, both positive and negative ion mode). We found that the number of detected lipid molecules decreases as the resolution of FTICR-MS increases. On the other hand, the number of detected lipids was found to level off as the injection amount of lipid mixtures increased above the certain amount.
more초록/요약
본 연구에서는 시간이 오래 걸리는 한계가 있는 액체 크로마토그래피탄뎀 질량 분석법의 단점을 극복하기 위한 방법으로서, 액체 크로마토그래피와 극초 분해능 질량 분석기를 연결하여 질량 값 만으로도 오차 범위 10 ppm 이내에서 정확히 측정한 지질의 질량 값과 액체 크로마토그래피에서의 분리시간을 비교하여 MS/MS 분석을 하지 않고도 정확한 질량값 확인이 가능한 방법을 검증하였다. 고 질량 정확도를 가진 질량 분석기를 이용하여 얻은 질량 값을 이용하여 웹-데이터베이스 상의 지질 후보군을 찾아내고, 또한 직접 주입 전기 분무 이온화 (direct-infusion ESI-MS)방법으로 지질 추출물에 대한 지질류 확인을 시도하여, 액체 크로마토그래피로 분리하여 얻은 결과와 비교, 확인하였다. 돼지의 뇌, 소의 간, 콩에서 추출한 지질 추출물로 양이온 모드와 음이온 모드에서 고성능 액체 크로마토그래피와 극초 분해능 질량 분석기로 실험하여 10ppm 의 mass tolerance 를 가지고 분석한 결과, 돼지의 뇌에서는 양이온 모드와 음이온 모드에서 각각 46 개 및 17 개의 지질 종들이 확인되었으며, 소의 간에서는 각각 39 개 및 17 개의 지질 종들이 확인되었다. 콩에서는 28 개 및 16 개의 지질 종들이 발견되었다.
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