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대장균 내 비천연아미노산 유입량을 간단하게 측정하는 분석 방법

초록/요약

비천연아미노산은 단백질 내에 존재하지 않지만, 흥미로운 작용기를 가진 아미노산을 말한다. 이 비천연아미노산은 유전적 도입을 통하여 위치 특이적으로 단백질 내에 도입할 수 있는데, 이를 위해서는 몇가지 전제 조건을 가진다. 이러한 조건들은 많은 연구를 통하여 확인 가능하지만, 아직까지도 확인이 어려운 조건도 있다. 바로 세포 안으로의 비천연아미노산 유입량이다. 지금까지 세포 안으로 유입되는 물질의 양은 동위원소 표지법을 이용하여 확인하였다. 그러나 이 방법은 너무 단계가 복잡하고 비천연아미노산에 적용하기가 쉽지 않다. 이러한 이유로 아직까지 세포 안으로의 비천연아미노산 유입량 정보는 보고 된 바 없다. 최근 세포 안으로 유입된 약물의 양을 확인하는 새로운 방법이 소개 되었다. 세포 밖의 배지에서 배양 전과 후의 약물의 변화량을 확인함으로써 세포 안으로의 유입량을 확인하는 것이다. 이 방법은 동위원소 표지를 쓸 필요가 없어 비교적 쉽게 사용할 수 있다. 하지만 이 방법 또한 불필요한 wash과정을 포함한다는 것과, 배지 내 존재하는 약물의 농도를 측정하는 분석 방법이 쉽지 않다는 단점을 가진다. 우리는 본 실험에서 위의 단점들을 극복한 새로운 세포 안으로의 비천연아미노산 유입량 확인 방법을 디자인 하였다. 이러한 방법은 기존의 방법들 보다 간편하고, 정확할 것으로 예상된다.

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