Expression of XFOR promoter is regulated by Transcription factor, XHex
- 발행기관 서강대학교 대학원
- 지도교수 김원선
- 발행년도 2008
- 학위수여년월 2008. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 생명과학
- 식별자(기타) 000000107550
- 본문언어 영어
목차
A nuclear orphan receptor, XFOR {Xenopus Farnesoid X receptor (FXR)-like Orphan Receptor}, is a liver molecular marker and it is postulated to be involved in lipid metabolism. XFOR starts to be strongly expressed in the developing Xenopus liver from stage 30. In vertebrate, another transcription factor Hex (hematopoietically expressed homeobox) has been known to be crucial for liver development. A Xenopus homologue of Hex, XHex has been shown to be expressed in anterior dorsal endomesoderm at gastrula stage. In the XHex specific morpholino antisense oligonucleotide (XHex - MO) injected Xenopus embryos, gene expressions of several liver molecular markers including XFOR are inhibited. The expression patterns of both genes and the experimental result from XHex - MO microinjection suggest that XHex directly regulates XFOR promoter. The present study was conducted to clarify whether XHex directly regulates XFOR in Xenopus laevis. In this end, Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) was performed. The result showed that “TTTCCC” is crucial for XHex protein binding to XFOR promoter. Expression of XFOR was found to be upregulated by XHex mRNA microinjection as measured by dual luciferase assay in Xenopus embryo. In addition, direct in vivo binding of XHex protein to XFOR promoter region was confirmed by chromatin immunoprecipitation assay. Above experimental results indicate that expression of XFOR is directly regulated by XHex.
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Xenopus의 체내에서 지질대사에 관여할 것으로 추정되는 XFOR {Xenopus Farnesoid X receptor (FXR)-like Orphan Receptor}는 대표적인 간 marker 유전자의 하나로써 발생중인 Xenopus 배아의 간에서 stage 30부터 발현이 시작된다. 한편 Homeobox 유전자이며, 전사인자로써 척추동물의 간 발달에 중요한 것으로 알려져 있는 Hex의 Xenopus homologue인 XHex (hematopoietically expressed homeobox)는 낭배 초기 anterior dorsal endomesoderm에서 발현이 시작된다. 또한 XHex의 translation을 방해하는 XHex 특이적인 morpholino antisense oligonucleotide (XHex-MO)는 XFOR의 발현을 감소시킨다. 이와 같은 XHex와 XFOR의 발현 패턴과 이들의 발현 상관 관계를 토대로 본 연구에서는 XHex와 XFOR 발현의 조절 관계를 좀 더 자세히 규명하고자 하였다. Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA)를 수행한 결과, XHex는 XFOR promoter에 존재하는 “TTTCCC”와 강하게 결합함을 보였으며 dual luciferase assay를 수행한 결과, XHex mRNA의 미세주입은 XFOR의 발현을 증가시키는 것으로 나타났다. 또한 Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) assay를 수행한 결과, XHex가 XFOR promoter의 “TTTCCC”와 직접적으로 결합하는 것을 확인할 수 있었다. 이상의 실험 결과는 XHex가 전사인자로써 XFOR의 promoter에 결합하여 XFOR의 발현을 직접적으로 조절한다는 것을 의미한다.
